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農林水産省

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担当:消費・安全局農産安全管理課

栽培用ナス及びピーマン種子における遺伝子組換え体の検査法

 1.概要

本検査法は、栽培用ナス及びピーマンの種子を検査対象とする。DNA抽出精製はGM quicker 2(ニッポンジーン社)を用い、1検体から2反復で実施する。抽出DNA試料中の目的遺伝子の有無を内在性遺伝子検出用プライマー対・プローブ及び組換え体由来遺伝子検出用プライマー対・プローブを用いたリアルタイムPCRで確認することより、検体が遺伝子組換え体を含むか判定する。

2.検査法

栽培用ナス及びピーマン種子における遺伝子組換え体の検査法(PDF:271KB)

3.個別事項の説明

検査対象

和名:ナス
学名: Solanum melongena L.

和名:ピーマン
学名:Capsicum annuum L.

DNA抽出精製

   ニッポンジーン社のGM quicker 2を使用。

  緩衝液中に抽出したDNAをシリカゲル膜に吸着させ、不純物を取り除いた後、溶出。

 

PCRプライマー対及びプローブ

1) ナス検査用

  名称 標的遺伝子 サイズ 遺伝子配列
1

ナスβ-fructosidase遺伝子配列検知プライマー対・プローブ

β-fructosidase 141bp

F(注):CTG CCT CCG TCA AGA TTT GGT CAC T

R:CTC TTC CCT TTC TTG ATG G

P:FAM- TAA TTC ATC CAA CCA TAT CT -MGB

2 35Sプロモーター配列検知プライマー対・プローブ P35S 101bp

F:ATT GAT GTG ATA TCT CCA CTG ACG T

R:CCT CTC CAA ATG AAA TGA ACT TCC T

P:FAM- CCC ACT ATC CTT CGC AAG ACC CTT CCT -TAMRA

3 NOSターミネーター配列検知プライマー対・プローブ NOS ter 151bp

F:GTC TTG CGA TGA TTA TCA TAT AAT TTC TG

R:CGC TAT ATT TTG TTT TCT ATC GCG T

P:FAM- AGA TGG GTT TTT ATG ATT AGA GTC CCG CAA -TAMRA

(注) F:フォワードプライマー、R:リバースプライマー、P:プローブ 

 

 2) ピーマン検査用

  名称 標的遺伝子 サイズ 遺伝子配列
1 ピーマンβ-fructosidase遺伝子配列検知プライマー対・プローブ β-fructosidase 134bp

F(注):CTG CCT CCG TCA AGA TTT GGT CAC T

R:ATC TTG GAT TTC TTG ATG GGA CGG T

P:VIC - GAT ATT CGA TCC TTC CCA - MGB 

2 35Sプロモーター配列検知プライマー対・プローブ P35S 101bp

F:ATT GAT GTG ATA TCT CCA CTG ACG T

R:CCT CTC CAA ATG AAA TGA ACT TCC T

P:FAM- CCC ACT ATC CTT CGC AAG ACC CTT CCT -TAMRA

3 NOSターミネーター配列検知プライマー対・プローブ NOS ter 151bp

F:GTC TTG CGA TGA TTA TCA TAT AAT TTC TG

R:CGC TAT ATT TTG TTT TCT ATC GCG T

P:FAM- AGA TGG GTT TTT ATG ATT AGA GTC CCG CAA -TAMRA

(注) F:フォワードプライマー、R:リバースプライマー、P:プローブ 

 

使用PCR機器及び反応条件

   1)検査法の開発・確立に使用したPCR機器

      ABI 7900HT、ABI 7600、Step One Plus(いずれもアプライドバイオシステムズ社)

   2)反応条件

      50℃, 2分間 → 95℃, 10分間 → [95℃, 15秒間 → 60℃, 1分間] × 45cycles

   3)PCR試薬

      Taqman Universal PCR Master Mix

  

妥当性確認 

8試験機関にて実施。

1) ナス

GM濃度(%) 試料数 正答率(%)(注1) 誤答率(%)(注2)
0.5% 56 100% 0%
0.1% 56 98.2% 1.8%
0% 56 100% 0%

 

2) ピーマン

GM濃度(%) 試料数 正答率(%)(注1) 誤答率(%)(注2)
0.5% 56 100% 0%
0.1% 56 96.4% 3.6%
0% 56 100% 0%

(注1) GM濃度が0%の試料については陰性と判断した比率、0.1及び0.5%の試料については陽性と判断した比率を示す。 

(注2) GM濃度が0%の試料については偽陽性率、0.1及び0.5%の試料については偽陰性率を示す。

 

検出下限

   0.1%

 

農林水産省事業名

 検査手順作成:平成23年度遺伝子組換え農作物リスク管理強化事業

 共  同  試  験 :平成26年度輸入栽培用種子中の未承認遺伝子組換え体検査対策事業

                              (栽培用種子の未承認遺伝子組換え体検査法確立事業)

 

References

1,2)-1 Journal of Agricultural and Food Chemistry, Volume 56, 2008, pp.1818-1828

Maher.C, Redouane.E.M, Aurelie.B, Marcel.R, Valerie.L, Dominique.B, and Yves.B.

"Development of a Real-Time PCR Method for the Differential Detection and Quantification of Four Solanaceae in GMO Analysis:Potato(Solanum Tuberosum), Tomato(Solanum Lycopersicum), Eggplant(Solanum Melongena), and Pepper(Capsicum Annuum)"

 1,2)-2,3 Journal of AOAC International, Volume 85, Number 5, September 2002, pp. 1077-1089(13)

Kuribara.H, Shindo.Y, Matsuoka.T, Takubo.K, Futo.S, Aoki.N, Hirao.T, Akiyama.H, Goda.Y, Toyada.M, and Hino.A.

"Novel Reference Molecules for Quantitation of Genetically Modified Maize and Soybean"

  

お問合せ先

消費・安全局農産安全管理課
担当者:組換え体管理指導班
代表:03-3502-8111(内線4510)
ダイヤルイン:03-6744-2102
FAX:03-3580-8592

 

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