担当：消費・安全局農産安全管理課

栽培用アマ種子における遺伝子組換え体(FP967)の検査法

1．概要

本検査法は、アマの種子を検査対象とする。DNA抽出精製はGenomic-tip 20/G （QIAGEN社）を用い、1検体から2反復でDNAを抽出精製する。抽出DNA試料中の目的遺伝子の有無を内在性遺伝子検出用プライマー対・プローブ及び組換え体由来遺伝子検出用プライマー対・プローブを用いたリアルタイムPCRで確認することより、検体が遺伝子組換えアマFP967を含むか判定する。

2．検査法

栽培用アマ種子における遺伝子組換えアマ(FP967)の検査法（PDF：245KB）

3.個別事項の説明

検査対象

和名: アマ
学名: Linum usitatissimum

DNA抽出精製

QIAGEN社のGenomic-tip 20/G を使用。

緩衝液中に抽出したDNAを陰イオン交換樹脂膜に吸着させ、不純物を取り除いた後、溶出。

PCRプライマー対及びプローブ

名称

標的遺伝子

サイズ

遺伝子配列 (注)

アマSAD遺伝子配列検知プライマー対・プローブ

（内在性遺伝子検出用）

SAD

68 bp

F：GCT CAA CCC AGT CAC CAC CT

R：TGC GAG GAG ATC TGG AGG AG

P：FAM- TGT TGA GGG AGC GTG TTG AAG GGA -BHQ1

NOSターミネーター及びスペクチノマイシン耐性遺伝子

の境界領域配列検知プライマー対・プローブ

（組換え体由来遺伝子検出用）

NOST-Spec

105 bp

F：AGC GCG CAA ACT AGG ATA AA

R：ACC TTC CGG CTC GAT GTC TA

P：FAM- CGC GCG CGG TGT CAT CTA TG -BHQ1

(注) F：フォワードプライマー、R：リバースプライマー、P：プローブ

使用PCR機器及び反応条件

1）検査法の開発・確立に使用したPCR機器

ABI 7900HT、ABI 7600（いずれもアプライドバイオシステムズ社）

2）反応条件

50℃, 2分間 → 95℃, 10分間 → [95℃, 15秒間 → 60℃, 1分間] × 45cycles

3）PCR試薬

Taqman Universal PCR Master Mix

検出限界

0.01%

※抽出DNAで算出（詳細は参考文献 1 参照）

参考文献

[1] Nakamura.K, Akiyama.H, Yamada.C, Satoh.R, Makiyama.D, Sakata.K, Kawakami.H, Mano.J, Kitta.K, and Teshima.R,

Novel Method to Detect a Construct-Specific Sequence of the Acetolactate Synthase Gene in Genetically-Modified Flax CDC Triffid(FP967), Biological and pharmaceutical Bulletin, 2010, 33(3), 532-534

お問合せ先

消費・安全局農産安全管理課
担当者：組換え体管理指導班
代表：03-3502-8111（内線4510）
ダイヤルイン：03-6744-2102

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